单B细胞抗体发现技术是直接从单个B淋巴细胞中分离筛选天然配对的特异性抗体的技术。这项技术的核心原理是利用每个B细胞只产生一种特异性抗体的特性，从免疫动物的组织或外周血中分离出抗原特异性的B细胞。通过单B细胞NGS测序技术，单个B细胞中获得配对的IgG重链和轻链的可变区基因，然后在哺乳动物细胞中表达，以获得具有生物活性的单克隆抗体。
为了能够加快抗体的发现周期，兼顾到筛选的通量，百英生物搭建了一个基于微流控技术的针对浆细胞的高通量快速筛选平台(AbDrop，Droplet Based Antibody Discovery Platform)。
除了AbDrop单B细胞抗体开发平台，我们的抗体发现服务还包括:
5-10小鼠
DNA、重组蛋白、mRNA-LNP、过表达细胞系等材料
2个月，保证库多样性
从脾脏和骨髓中分离浆细胞
筛选 2E6 浆细胞
基于蛋白质/细胞的结合
单细胞测序
独特序列，确保正确配对
2周时间
多种验证检测（ELISA、SPR、FACS、内化、ADCC 等）
表达62个mAb，59 个具有ELISA结合活性。
Of the 59 mAbs, 53 Abs have affinity superior to benchmark antibody (positive control).
| Ligand | 1:1 binding ka (1/Ms) | kd (1/s) | KD (M) |
|---|---|---|---|
| Ab1 | 4.26E+05 | 1.78E-04 | 4.18E-10 |
| Ab2 | 4.37E+05 | 1.86E-04 | 4.25E-10 |
| Ab3 | 3.67E+05 | 1.76E-04 | 4.80E-10 |
| Ab4 | 2.27E+05 | 1.12E-04 | 4.92E-10 |
| …… | …… | …… | …… |
| Positive control | 2.46E+05 | 1.48E-03 | 6.01E-09 |
| Ab54 | 1.90E+05 | 1.59E-03 | 8.38E-09 |
| …… | …… | …… | …… |
| Ab59 | 1.00E+05 | 2.14E-03 | 2.14E-08 |
Diversity analysis indicated excellent CDR protection.
我们分析了59种抗体的轻链和重链CDR序列的多样性，显示出良好的多样性。
所有抗体的表位装箱，发现这些命中主要可分为4个表位组。B6924（Nivolumab生物类似物）和B2014（派姆单抗生物类似物）为阳性对照。结果显示，与对照组相比，我们已经鉴定出了许多与PD-1上不同表位结合的抗体。
挑选40个候选分子进行表达，其中29个展现了良好的抗原结合活性以及亲和力，阳性率为73%。
| ID | EC50(nM) | ID | EC50(nM) | ID | EC50(nM) | ID | EC50(nM) |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Anti-SMC-1 | 0.4707 | Anti-SMC-11 | 0.9066 | Anti-SMC-21 | 0.2834 | Anti-SMC-31 | 0.5117 |
| Anti-SMC-2 | 0.5387 | Anti-SMC-12 | 0.6578 | Anti-SMC-22 | 0.4778 | Anti-SMC-32 | 0.5487 |
| Anti-SMC-3 | 0.4586 | Anti-SMC-13 | 0.504 | Anti-SMC-23 | 0.8434 | Anti-SMC-33 | 0.8323 |
| Anti-SMC-4 | 0.3872 | Anti-SMC-14 | / | Anti-SMC-24 | / | Anti-SMC-34 | 0.5485 |
| Anti-SMC-5 | / | Anti-SMC-15 | 0.5013 | Anti-SMC-25 | / | Anti-SMC-35 | 0.9549 |
| Anti-SMC-6 | / | Anti-SMC-16 | 0.532 | Anti-SMC-26 | 0.4189 | Anti-SMC-36 | 1.045 |
| Anti-SMC-7 | / | Anti-SMC-17 | 0.7496 | Anti-SMC-27 | / | Anti-SMC-37 | 0.3245 |
| Anti-SMC-8 | 0.4931 | Anti-SMC-18 | / | Anti-SMC-28 | / | Anti-SMC-38 | 0.4808 |
| Anti-SMC-9 | 0.4418 | Anti-SMC-19 | 0.5907 | Anti-SMC-29 | 0.9691 | Anti-SMC-39 | / |
| Anti-SMC-10 | / | Anti-SMC-20 | 0.4797 | Anti-SMC-30 | 0.3343 | Anti-SMC-40 | 0.4509 |
百英使用的方法是基于微流控的平台。这使我们能够以高通量分析单个 B 细胞及其抗体库，并保证精度。它涉及微芯片上的小型化通道和腔室，其中捕获并分离单个 B 细胞。我们可以对每个进行各种分析细胞，包括基因测序、功能测定和表型表征。
与杂交瘤技术与噬菌体展示技术相比，单B细胞筛选抗体发现在开发周期上更快，快至少3个月。同时比杂交瘤技术文库大，且Biointron的单B细胞平台，可以保证抗体的轻重链天然配对，很具性价比。
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