哺乳动物蛋白表达 哺乳动物蛋白表达
蛋白表达

哺乳动物蛋白表达

  • 基础研究
  • 治疗性研究
  • 最快2周交付

服务介绍

重组蛋白表达在治疗和应用领域的需求很高,特别是对于生物技术和制药公司来说,这是一种治疗人类疾病的变革性方法。除了工业用途外,学术研究小组也可以依赖重组蛋白进行功能研究和高分辨率结构确定。


百英生物可提供CHOK1和HEK293的哺乳动物细胞表达服务。哺乳动物蛋白表达通常因其能够产生复杂蛋白和翻译后修饰(PTM)能力而被青睐,此外还有抗原制备、抗体发现和结构及功能研究。


除此之外,百英生物也有依据大肠杆菌(E. Coli)的原核蛋白表达系统,E. Coli具有快速培养和易于遗传操作的优点,并且产生多样化蛋白类型方面有着良好的表现记录。百英生物的重组蛋白表达平台,表达的蛋白产品质量高、表达周期快,同时保证性价比,欢迎咨询!

哺乳动物蛋白表达 Overview

如何在哺乳动物细胞中表达

通过哺乳动物细胞系统技术进行的表达通常始于您所选序列的合成。在构建质粒载体之后,我们将重组载体转染进CHOK1(中国仓鼠卵巢)细胞或HEK293(人类胚胎肾)细胞中进行蛋白质的表达和纯化,并采用严格的质量控制措施SDS-PAGE分析,来确认其存在和纯度。

如何在E. Coli中表达

通过E. coli进行的表达是一个多步骤的过程,它始于设计并构建一个携带所需蛋白质基因序列的质粒。此后,该质粒被转化入目标宿主工程菌中,然后在受控条件下培养以促进细菌生长并通过诱导剂诱导蛋白表达。达到最佳表达水平后,细菌被裂解以释放蛋白质,然后使用包括亲和层析或离子交换在内的等多种纯化方法进行纯化。

应用

通过哺乳动物细胞进行的表达是临床使用的重组蛋白生产系统的首选,数百个生物制药候选产品正在临床开发中。

基础研究

  • 真核蛋白质的合成、加工和分泌信号被哺乳动物细胞正确识别
  • 允许适当的蛋白质折叠、糖基化和翻译后修饰,这些通常是体外和体内系统完全生物学活性的要求
  • 蛋白质结构、功能和表征研究

治疗性开发

  • 单克隆抗体(mAbs)的生产、抗体筛选和抗体库
  • 适用与细胞系、载体和转染方法学
  • 重要临床活性病毒表面抗原的生产
  • 包括免疫学和肿瘤学应用的生物技术研究领域

服务亮点

基础研究

  • 真核蛋白质的合成、加工和分泌信号被哺乳动物细胞正确识别
  • 允许适当的蛋白质折叠、糖基化和翻译后修饰,这些通常是体外和体内系统完全生物学活性的要求
  • 蛋白质结构、功能和表征研究

治疗性开发

  • 单克隆抗体(mAbs)的生产、抗体筛选和抗体库
  • 适用与细胞系、载体和转染方法学
  • 重要临床活性病毒表面抗原的生产
  • 包括免疫学和肿瘤学应用的生物技术研究领域

快速交付

  • 仅2-3周即可完成哺乳动物细胞系统表达
  • 通过哺乳动物细胞表达是临床应用的主要重组蛋白生产系统
  • 数百个生物制药候选产品正在临床开发中

服务流程

序列设计与合成

质粒构建和制备

瞬转表达

亲和纯化

质量检测

冷链发货

哺乳动物蛋白表达
服务详情

Service Step 服务详情 周期 交付物
基因合成和亚克隆
  • 密码子优化和基因合成
  • 亚克隆到表达质粒
  • 质粒验证和大量抽提
2-3周
  • 纯化的蛋白 (SDS-PAGE>90%, Endotoxin<1EU/mg)
  • COA报告
  • SEC-HPLC检测
100ml小量表达
  • 细胞瞬时转染
  • 重组蛋白纯化
  • QC分析
大规模表达纯化(1L-100L)
  • 大规模瞬转表达
  • 重组蛋白纯化
  • QC分析
2-3周
  • 保证蛋白产量 (SDS-PAGE>90%, Endotoxin<1EU/mg)
  • COA报告
  • SEC-HPLC检测

案例分享

  • 案例1: PD-L1 (Fc tag), Extracellular domain (Phe19-Thr239) expressed in CHO
    SDS-PAGE

    R: Reducing condition;

    N-R: Non-reducing condition;

    M: Marker

    Detector A Channel 2 280nm
  • 案例2: CD137 (His tag), Extracellular domain (Leu24-Gln186) expressed in HEK293
    recombinant-case2-1

    R: reducing condition;
    M: Marker

    recombinant-case2-2

    Human CD137L/mFC; Human CD137/ His;
    Recombinant Human CD137/His is captured on Protein A chip, can bind to Human CD137L/mFc.

    recombinant-case2-3

    Log Human CD137, His tag EC50=4ng/ml
    CD137 is immobilized at 2µg/mL (100 µL/well), it can bind to Utomilumab. The concentration for 50% of maximal effect(EC50) of is 4 ng/ml.

    recombinant-case2-4

    Log Human CD137, His tag EC50=20ng/ml
    CD137 is immobilized at 2µg/mL (100 µL/well), it can bind to Human CD137L. The concentration for 50% of maximal effect(EC50) of is 20 ng/ml.

“我们根据客户的需求量身定制相应的服务,提供使用CHOK1或HEK293细胞进行哺乳动物重组蛋白表达。每个项目的成功交付,都展现了生物技术具备创造的可能性,并最终带来更多的应用价值。”
Yiyang Ge
葛依阳
百英生物科学家

FAQs

  • 为什么要使用基于哺乳动物的细胞表达?

    使用哺乳动物宿主系统是产生最生理原生的重组蛋白的理想选择,如果需要的话,可以进行正确的磷酸化或适当折叠,以便在人类中用于治疗使用。

  • CHO-K1或HEK293细胞有什么区别?

    根据客户的需求,百英生物提供CHO-K1和HEK293细胞,使用哺乳动物细胞系统进行表达。 一般情况下,如果客户需要更高纯度的蛋白,我们会建议使用HEK293细胞制备融合蛋白。如果客户需要高产量的抗体,我们比较推荐使用CHO-K1细胞。

  • 为什么CHO细胞经常用于哺乳动物蛋白表达?

    CHO细胞常用于哺乳动物蛋白表达的原因在于它们具备多项优势:首先,CHO细胞具有良好的遗传稳定性,不会发生基因丢失或表达量下降的情况;其次,CHO细胞适合大规模悬浮培养,适应无血清或化学成分的培养基,利于排除培养基中血清蛋白对后期产物纯化的干扰;此外,CHO细胞作为表达系统已经非常成熟,得到了药品监管机构的广泛接受,且现代基因组编辑技术,如CRISPR/Cas9系统,可以在CHO细胞中进行高效的基因敲除、敲入和定点编辑,进一步增强了CHO细胞在基因操作方面的灵活性。因此,CHO细胞成为了哺乳动物蛋白表达的优选系统,尤其在需要复杂翻译后修饰的治疗性蛋白药物生产中。 3, 4

参考文献

  • Malm, M., Kuo, C., Barzadd, M. M., Mebrahtu, A., Wistbacka, N., Razavi, R., Volk, A., Lundqvist, M., Kotol, D., Tegel, H., Hober, S., Edfors, F., Gräslund, T., Chotteau, V., Field, R., Varley, P. G., Roth, R. G., Lewis, N. E., Hatton, D., . . . Rockberg, J. (2022). Harnessing secretory pathway differences between HEK293 and CHO to rescue production of difficult to express proteins. Metabolic Engineering, 72, 171-187. https://doi.org/10.1016/j.ymben.2022.03.009
  • Haldankar, R., Li, D., Saremi, Z. et al. Serum-free suspensin large-scale transient transfection of CHO cells in WAVE bioreactors. Mol Biotechnol 34, 191–199 (2006). https://doi.org/10.1385/MB:34:2:191
  • Khan, K. H. (2013). Gene Expression in Mammalian Cells and its Applications. Advanced Pharmaceutical Bulletin, 3(2), 257-263. https://doi.org/10.5681/apb.2013.042
  • Gray, D. (1997). Overview of Protein Expression by Mammalian Cells. Current Protocols in Protein Science, 10(1), 591-5918. https://doi.org/10.1002/0471140864.ps0509s10

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