VHH antibody是参考羊驼、骆驼及美洲驼的单域抗体结构( 无轻链及CH1区) ，将2个或多个抗体分子的VH区进行连接而实现多特异性结合，简化结构仍保留VH区。该类产品的主要优点是分子小、稳定性高、免疫原性低、易于人源化、易于连接，并可通过多种途径进行给药。此外，在分子设计时可选择加入与人血白蛋白结合的功能区，将半衰期延长至2 -3 周，并且可以通过白蛋白将药物运输至靶位点。这些特点使得 VHH 在基础研究、诊断及治疗上具有极大的应用价值。
百英生物拥有高通量单域抗体生产的经验，丰富的VHH及HcAb定制经验可为客户提供基于HcAb纳米抗体研发与生产的全方位的服务。同时提供抗体药物的一站式筛选平台，有配套的纳米抗体人源化和亲和力成熟等抗体工程改造服务。
100只以上羊驼
同时进行固相和液相淘选
2免，3免，4免分开建库，保证最大库容
| 步骤 | 服务内容 | 周期 | 交付 |
|---|---|---|---|
| 第一步: 抗原准备 /抗原验证 | 客户提供抗原或者百英制备抗原 | 2周抗原制备； 2-3天抗原验证 | ▸1mg 纯化后的抗原(百英定制). ▸如果客户提供抗原，质量标准： 1. >4mg 2. SDS-PAGE >95% 3. Endotoxin <1EU/mg |
| 第二步: 羊驼免疫与PBMC分离 | ▸5 ml 未免疫血清 ▸测定ELISA效价（2免，3免，4免） ▸50ml PMBC （2免，3免，4免），存放在Trizol 中 | 8-11 周 | ▸如果由于抗原毒性导致的羊驼死亡,需要收取一定费用 ▸根据 ELISA结果（2免，3免，4免），客户决定如何建库 |
| 第三步: 噬菌体文库构建 | ▸RNA 抽提和cDNA 准备 ▸VHH 抗体库构建 ▸E. coli电转感受态制备 ▸免疫库丰度和库容测定 ▸克隆筛选和测序验证 | 3-5 周 | VHH 库容 ~1*109 |
| 第四步: 噬菌体文库淘选 | ▸至少3轮淘选(液相和固相) ▸ 阳性克隆的ELISA验证、鉴定、筛选和测序（200个克隆测序） ▸阳性克隆测序及测序结果分析 | 10-12 周 | 保证至少 20 个序列 |
VHH-Fc 抗体生产(选做) | ▸基因合成、亚克隆、质粒制备 ▸瞬时表达与纯化 ▸质控分析 | 2 周 | 纯化的抗体 (SDS-PAGE >95%, Endotoxin <1EU/mg) |
| 亲和力排序 (选做) | Biacore 8K | 1-2 周 | |
| 备注: 如果 4免后ELISA 效价低于1:5,000, 我们建议终止项目，收取第一步和第二步费用。 | |||
After panning and screening, 53 unique sequences were obtained & expressed in HTP CHO expression system.
Validation of VHHs Binding to X (by ELISA)
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49 of 53 VHH Antibodies bound to X (ELISA)
Validation of VHHs affinity with X (by SPR)
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| Affinity range 5.36x10-7 M to 7.66x10-10 M. |
48 of 53 VHH Antibodies bound to X (SPR)
Validation of Cell-based VHHs Binding to X (FACS)
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43 of 53 VHH Antibodies Bound against CHO-Kl/X Cell
VHHs Agonist Activity Validation
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31 of 53 antibodies showed significant agonist activity
Alpacas were immunized with Claudin 18.2-encoding DNAs, followed by immunizations with Claudin 18.2-overexpressing cells.
Alpaca serum taken after immunization manifested specific binding to Claudin 18.2- overexpressing cells (but not to parental ones).
 |  |  Phage Library construction from PBMC Library size is ~1.1x10E10 Insert rate >95% |
| Antigen | Immunization |
|---|---|
| DNA encoding Target A | 1&2 |
| CHO-K1-Target A | 3, 4, 5 |
| Cell panning | Input (CFU/ml) | Output | Output/Input |
|---|---|---|---|
| 1 | 2.00E+12 | 9.00E+07 | 4.50E-05 |
| 2 | 1.33E+12 | 2.10E+08 | 2.10E+08 |
| 3 | 2.10E+08 | 2.10E+08 | 2.10E+08 |
| Total clone | OD450 (293T-Target A) >0.5 | OD450 (293T-blank) >0.1 | Combined with Target A clone number | Targeted Clone % | Unique | |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 0635-Human Target A | 88 | 2 | 0 | 2 | 2.27% | 1 |
| 0635-Human Target A | 88 | 18 | 12 | 6 | 6.82% | 2 |
| 0635-Human Target A | 88 | 55 | 41 | 14 | 15.91% | 10 |
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Four VHHs obtained specifically bound to human Claudin 18.2, but not to Claudin 18.1.
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